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        復方磷酸可待因(歐博士止咳露)溶液微生物限度檢查法驗證實驗



        錄入時間:2011-6-13 14:16:04 來源:互聯網

         
         
        1. 樣品復方磷酸可待因(歐博士止咳露),批號309315 、402021,生產廠家為香港歐化藥業有限公司。
        2. 驗證用菌種 枯草桿菌CMCC(B)63501、金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003、大腸埃希菌CMCC(B)44102、白色念珠菌CMCC (F) 98001、 黑曲霉CMCC(F)98003。
        3. 方法 中國藥典有關微生物限度檢查法方法驗證試驗。                        
        4. 具體操作方法
            4.1菌液制備:
        (1) 取經37℃培養18~24h,金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌的肉湯培養物1ml+9ml鹽水,10倍稀釋至10-5 ~10-7,細菌數約為50~100cfu/ml,做活菌計數備用。
        (2) 經25 ℃培養18~24小時的白色念珠菌霉菌液體培養物1ml+9 ml鹽水10倍稀釋至10-5 ~10-7,細菌數約為50~100cfu/ml,做活菌計數備用。
        (3) 取經25 ℃培養1周的黑曲霉斜面培養物,加3~5ml鹽水洗下霉菌孢子,吸取出菌液, 用標準比濁管比濁,然后取1 ml +9 ml鹽水,逐管10倍稀釋為10-4,細菌數約為50~100cfu/ml,做活菌計數備用。
        4.2 供試液制備 吸取樣品10 ml ,加0.1%蛋白胨水氯化鈉稀釋液90ml濃度均為1:10供試液,分別人工污染上述5種代表試驗菌株。
        4.3 培養基稀釋法: 采用加0.5 ml、0.2 ml、0.1 ml /皿供試液,再加15~20 ml瓊脂培養基,待凝固后,置規定溫度培養24~48小時觀察結果細菌計數,測定回收率。結果見表:
        4.4 回收率測定:
        (1) 試驗組: 分別取不同品種的1:10供試液1 ml、50~100個/ ml 試驗菌株同時加入平皿中,立即傾注瓊脂培養基,待凝固后,置規定溫度培養24~72小時觀察結果。薄膜過濾法以最后一次的沖洗液加入試驗菌.
        (2) 活菌組 測定每一菌株的試驗菌數
        (3) 供試液對照 測定供試品本底菌數
        (4) 稀釋劑對照組
        5 結果
        菌落計數結果、常規法和培養基稀釋法在復方磷酸可待因微生物限度檢查法的驗證結果見表1、2和表3。
        表1     菌落計數(cfu/ml)  
        實驗次數
        金葡菌10-5
        枯草桿菌10-5
        白色念珠菌10-5
        黑曲霉10-4
        大腸埃希菌10-7
        1                                  
        94、90
        130、80
        73、72
        110、90
        14、15
        2                                        
        80、74
        45、 23
        128、108
        110、120
        54、34
        3                                       
        153、150
        78、 77
        73、74
        110、100
        30、27
         
                                             
        從表2結果可以看出: (1)采用常規方法檢驗復方磷酸可待因溶液供試品,人工污染5株代表菌株,該供試品對大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率試驗均高于70%,可采用常規方法檢驗。(2)復方磷酸可待因對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌有不同程度的抗菌活性,供試品回收率為0.02~29.2%,均低于70%。
        表2   復方磷酸可待因微生物限度檢查方法驗證 (常規法)   
         
        實驗次數
        人工染菌回收率%
        金葡菌  
          枯草桿菌
        白色念珠菌
        黑曲霉
        大腸埃希菌
        1
        0.02                            
        71.4
        81.1
        100.0
        100.0
        2
        29.2                              
        29.4
        100.0
        100.0
        100.0
        3
        抑菌
        抑菌
        100.0
        100.0
        100.0
             
          表3  培養基稀釋法(1ml加2個平皿)復方磷酸可待因微生物限度檢查驗證
        實驗次數
        人工染菌回收率%
         
         
        金葡菌
        枯草桿菌
        1
        80.7
        100.0
        2
        91.4
        100.0
         
               
                       
            表3中的結果證明,采用培養基稀釋法可消除供試品對人工污染金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的抑菌作用;厥章蔬_到70%以上。因此,培養基稀釋法(0.5ml/皿)可用于復方磷酸可待因(歐博士止咳露)的微生物限度檢查。
        6 結論
        根據驗證試驗結果,確定復方磷可待因(歐博士止咳露)溶液微生物限度檢查法為細菌數測定可采用培養基稀釋法(0.5ml/皿)測定,霉菌數可采用常規法測定。
        注:常規法為1ml供試液加15~20ml菌落計數用培養基;培養基稀釋法則為0.5ml供試液加15~20ml菌落計數用培養基為2倍稀釋,0.2ml供試液加15~20ml菌落計數用培養基為5倍稀釋。

         

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